Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137L (m): sc-423455

Présentation

Tnfsf9 code pour CD137L (4-1BBL), un ligand de la superfamille TNF exprimé principalement par les cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à CD137 (TNFRSF9) afin de délivrer de puissants signaux de costimulation aux lymphocytes T et à d’autres effecteurs immunitaires. La signalisation CD137L–CD137 favorise l’activation des voies NF-κB et MAPK, soutenant l’expansion et la survie des lymphocytes T, la production de cytokines et l’orientation des réponses mémoires, avec des effets supplémentaires sur la maturation des cellules dendritiques et la fonction des cellules myéloïdes. Dans des modèles murins, l’activité de Tnfsf9 est impliquée dans la régulation des circuits inflammatoires et de l’homéostasie immunitaire, influençant des contextes tels que l’auto-immunité, l’inflammation chronique et la surveillance immunitaire des tumeurs. Ces rôles font de CD137L un nœud utile pour disséquer les phénotypes immunitaires dépendants de la costimulation et les réponses induites par l’antigène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137L (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfsf9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfsf9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfsf9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD137L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfsf9 pour l'étude de la signalisation de CD137L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfsf9 essentiels à la fonction de CD137L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfsf9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD137L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD137L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfsf9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD137L plasmide HDR (m) et le CD137L (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfsf9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfsf9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.