Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD137L: sc-404974-ACT

TNFSF9 code pour CD137L (4-1BBL), un ligand de la superfamille du TNF exprimé par les cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à CD137/TNFRSF9 sur les lymphocytes T et les cellules NK activés afin d’amplifier la signalisation co-stimulatrice. Les interactions CD137L–CD137 favorisent la maturation de la synapse immunologique, la production de cytokines et des programmes de survie via les voies NF-κB et MAPK, orientant les réponses cytotoxiques et mémoire. Cet axe contribue à la régulation des microenvironnements inflammatoires et au dialogue entre cellules immunitaires dans des contextes tels que l’auto-immunité, les infections chroniques et l’immunité antitumorale, où une co-stimulation altérée peut modifier la fonction effectrice et l’épuisement immunitaire. De plus, la signalisation via CD137L peut influencer les états d’activation myéloïdes et la dynamique de présentation de l’antigène, aspects pertinents pour des modèles de recherche en immunologie et en oncologie.

CD137L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFSF9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD137L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFSF9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFSF9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD137L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFSF9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD137L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD137L dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFSF9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.