Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137 (h): sc-405068

Présentation

TNFRSF9 code pour CD137 (4-1BB), un récepteur co-stimulateur inductible de la superfamille des récepteurs du TNF, exprimé à la surface des lymphocytes T activés ainsi que d’autres sous-populations immunitaires. Lorsqu’il est engagé, CD137 recrute des adaptateurs TRAF afin d’activer les voies de signalisation NF-κB et MAPK, favorisant la survie cellulaire, la prolifération, la production de cytokines et la reprogrammation métabolique au cours des réponses immunitaires. Cette voie contribue à la régulation de l’activité des lymphocytes cytotoxiques, de la fonction des cellules dendritiques et des signaux inflammatoires au sein du microenvironnement tissulaire. Une signalisation TNFRSF9/CD137 dérégulée a été associée à des états d’activation immunitaire altérés observés dans des contextes de recherche en immuno-oncologie, d’infections chroniques et de maladies auto-immunes ou inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNFRSF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNFRSF9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNFRSF9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD137.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNFRSF9 pour l'étude de la signalisation de CD137, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNFRSF9 essentiels à la fonction de CD137
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNFRSF9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD137 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD137 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNFRSF9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD137 plasmide HDR (h) et le CD137 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNFRSF9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNFRSF9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.