Plasmide Double Nickase (h) CD10: sc-400856-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD10 Double Nickase (h) et le plasmide CD10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MME. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD10 Antibody (F-4): sc-46656
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD10 | sc-400856-NIC | 20 µg | $410.00 |
MME code pour CD10 (néprilysine), une métalloprotéase endopeptidase membranaire dépendante du zinc qui régule le milieu peptidique extracellulaire en clivant divers substrats bioactifs, notamment les enképhalines, les peptides natriurétiques et des peptides apparentés à l’endothéline. En modulant la disponibilité des ligands et l’amplitude de la signalisation des récepteurs, CD10 influence des voies liées à la communication intercellulaire, au tonus inflammatoire et au remodelage tissulaire dans les compartiments épithélial et hématopoïétique. CD10 est largement utilisé comme marqueur de lignée et de différenciation, et son état d’expression est fréquemment étudié dans des travaux sur les programmes développementaux et les phénotypes associés aux tumeurs, où des modifications du traitement protéolytique peuvent remodeler la signalisation du microenvironnement. La perturbation fonctionnelle de MME offre une approche pratique pour disséquer les réseaux du métabolisme des peptides et les réponses transcriptionnelles en aval dans des modèles cellulaires humains.
CD10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MME dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MME. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MME. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MME.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.