Plasmide Double Nickase (h) CCDC109A: sc-413850-NIC

MCU (CCDC109A) code la sous-unité formant le pore du complexe uniporteur mitochondrial du calcium, qui assure l’entrée de Ca²⁺ à travers la membrane mitochondriale interne. En modulant les transitoires de Ca²⁺ mitochondriaux, MCU fait le lien entre la signalisation cytosolique et la phosphorylation oxydative, l’activation des déshydrogénases du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène, influençant ainsi la production d’ATP et la flexibilité métabolique. La gestion du Ca²⁺ dépendante de MCU s’articule également avec la transition de perméabilité mitochondriale et des voies liées à l’apoptose, affectant les réponses au stress et les décisions de destinée cellulaire. Une activité dysrégulée de MCU a été associée à des altérations de la bioénergétique et de la signalisation calcique dans des contextes tels que les dysfonctionnements cardiométaboliques, la neurodégénérescence et la biologie tumorale, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques sur la signalisation mitochondriale.

CCDC109A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCU dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCU. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCU. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCU.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.