Plasmide CRISPR/Cas9 KO CBS (h): sc-400877

Présentation

La cystathionine bêta-synthase (CBS) est une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse la condensation de la sérine et de l’homocystéine pour former la cystathionine, orientant ainsi l’homocystéine vers la voie de transsulfuration. En reliant le métabolisme « un carbone » à la biosynthèse de la cystéine, la CBS influence l’équilibre rédox cellulaire via la production en aval de glutathion et contribue à l’homéostasie des acides aminés soufrés. L’activité de la CBS soutient également la production endogène de sulfure d’hydrogène, avec des effets sur la fonction mitochondriale et la signalisation liée aux réponses au stress. La dérégulation de la CBS est associée à l’hyperhomocystéinémie et à des erreurs innées du métabolisme du soufre, et des modifications de l’expression de CBS ont été étudiées dans des contextes de stress oxydant et de reprogrammation métabolique pertinents pour des phénotypes cardiovasculaires et neurodéveloppementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CBS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CBS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CBS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CBS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CBS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CBS pour l'étude de la signalisation de CBS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CBS essentiels à la fonction de CBS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CBS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CBS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CBS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CBS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CBS plasmide HDR (h) et le CBS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CBS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CBS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.