cathepsin K Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400673-ACT

CTSK codifica a catepsina K, uma protease cisteínica lisossomal com elevada atividade colagenolítica e elastolítica, que dá suporte à renovação da matriz extracelular e ao remodelamento tecidual. Nos osteoclastos, a catepsina K atua na lacuna de reabsorção para degradar colágeno tipo I e outras proteínas da matriz óssea, conectando o CTSK a vias que governam a diferenciação de osteoclastos, a proteólise dependente de acidificação e a homeostase óssea. Além da biologia esquelética, a atividade de CTSK está implicada no remodelamento da matriz mediado por macrófagos e em microambientes inflamatórios, nos quais o equilíbrio de proteases influencia a migração celular e a arquitetura do nicho. A expressão ou atividade desregulada de CTSK tem sido associada a distúrbios de densidade óssea e a fenótipos de remodelamento, bem como a contextos mais amplos de remodelamento do tecido conjuntivo e cardiovascular.

cathepsin K O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTSK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin K O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTSK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTSK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin K. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTSK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin K no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin K em células tumorais com expressão de CTSK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.