Plasmide CRISPR d'Activation (m) CAS: sc-431044-ACT

Le gène murin **Cse1l** code **CAS**, une protéine de la famille des karyophérines qui agit comme une exportine pour l’importine‑α, en régulant le transport nucléocytoplasmique et le recyclage de la machinerie d’import nucléaire. En contrôlant le trafic nucléaire, CAS contribue à la progression du cycle cellulaire, à la prolifération et à des programmes transcriptionnels sensibles au stress, reliant la dynamique du transport à la régulation de la chromatine et à la fidélité de la mitose. Une activité altérée de CAS a été associée à des modifications de l’apoptose, de la migration cellulaire et de la stabilité du génome, des processus fréquemment étudiés dans l’oncogenèse et les phénotypes du développement. **Cse1l** est donc pertinent pour étudier comment le transport nucléaire s’articule avec les voies de signalisation et le contrôle transcriptionnel dans des états cellulaires liés aux maladies.

CAS Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cse1l sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CAS Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cse1l dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cse1l, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CAS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cse1l natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CAS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CAS dans les cellules tumorales présentant une expression de Cse1l silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.