Plasmide CRISPR d'Activation (h) CARP: sc-401842-ACT

Le gène humain **ANKRD1** code la **cardiac ankyrin repeat protein (CARP)**, un cofacteur transcriptionnel sensible au stress, enrichi dans le muscle strié, qui fait la navette entre le sarcomère et le noyau. CARP intègre les signaux mécaniques et hypertrophiques en modulant des programmes d’expression génique liés à l’organisation du sarcomère, au remodelage du cytosquelette et au développement du muscle cardiaque, notamment via des interactions avec des régulateurs transcriptionnels tels que les voies de signalisation associées à **YAP/TEAD** et à **NF-κB**. Une expression altérée d’ANKRD1/CARP a été associée au remodelage lié aux cardiomyopathies et à des phénotypes plus larges de stress musculaire, ce qui en fait une cible utile pour étudier la mécanotransduction et l’adaptation transcriptionnelle. Des modèles in vitro reposant sur la perturbation d’ANKRD1 sont couramment utilisés pour analyser les réseaux géniques de la contractilité, l’intégrité myofibrillaire et les modifications transcriptomiques induites par le stress.

CARP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANKRD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CARP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANKRD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANKRD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CARP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANKRD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CARP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CARP dans les cellules tumorales présentant une expression de ANKRD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.