Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaMKI: sc-401136-ACT

Le gène humain **CAMK1** code **CaMKI**, une kinase sérine/thréonine dépendante du calcium/de la calmoduline, qui convertit les signaux intracellulaires de Ca2+ en événements de phosphorylation contrôlant des programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et la progression du cycle cellulaire. CaMKI s’intègre aux réseaux de signalisation Ca2+/CaM et peut relier l’activité neuronale à l’expression génique via des cascades de kinases en aval et des voies associées à CREB, soutenant l’extension des neurites et des processus liés à la plasticité synaptique. Au-delà du système nerveux, l’activité de CAMK1 a été impliquée dans des contextes de signalisation plus larges influençant la prolifération et les réponses au stress, ce qui la rend pertinente pour les études mécanistiques des dérégulations de signalisation observées dans des maladies complexes. Une signalisation altérée des kinases dépendantes du Ca2+ est fréquemment associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’au remodelage de voies associé au cancer, faisant de CAMK1 un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation.

CaMKI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaMKI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaMKI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaMKI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaMKI dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.