calsequestrin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419472-ACT

O gene **Casq2** do camundongo codifica a **calsequestrina 2**, uma proteína luminal do **retículo sarcoplasmático (RS)** com alta capacidade de ligação a **Ca2+**, que atua como tampão e organiza os estoques de Ca2+ para sustentar o acoplamento excitação–contração. Ao modular o comportamento do canal do **receptor de rianodina (RYR2)** e a cinética da liberação de Ca2+ induzida por Ca2+, a CASQ2 influencia a ciclagem de Ca2+, a refratariedade do RS e a estabilidade contrátil dos miócitos. A perturbação da homeostase de Ca2+ dependente de CASQ2 está associada a mecanismos arritmogênicos desencadeados por estresse e a programas alterados de sinalização intracelular de Ca2+, tornando o Casq2 um nó central na pesquisa em eletrofisiologia cardíaca e no manejo de cálcio. Em sistemas modelo, a modulação de Casq2 é comumente usada para investigar o tamponamento de Ca2+ no RS, a dinâmica de “sparks” de Ca2+ e as respostas de sinalização a jusante frente à interrupção do fluxo de Ca2+.

calsequestrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Casq2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

calsequestrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Casq2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Casq2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de calsequestrin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Casq2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de calsequestrin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via calsequestrin 2 em células tumorais com expressão de Casq2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.