Particules Lentivirales d'Activation (h) Calregulin: sc-400775-LAC

CALR code pour la calréguline, une chaperonne luminale du réticulum endoplasmique (RE) qui se lie au Ca²⁺ et coordonne le repliement des glycoprotéines ainsi que le contrôle qualité via le cycle calnexine/calréguline. La calréguline soutient la protéostasie du RE en coopérant avec ERp57 et les voies de chaperonnes lectines afin de réguler la formation des ponts disulfure, la rétention dans le RE et le trafic des protéines sécrétoires et membranaires naissantes. Au-delà du RE, la calréguline influence l’homéostasie du Ca²⁺, l’adhésion dépendante des intégrines et la signalisation du stress liée à la réponse aux protéines mal repliées (UPR). Une activité de CALR altérée et les réponses de stress du RE sont associées à une dérégulation de la signalisation immunitaire et à des phénotypes oncogéniques, et les mutations de CALR présentent une pertinence établie dans les néoplasies myéloprolifératives, ce qui motive des études mécanistiques sur les conséquences en matière de repliement protéique et de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales Calregulin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CALR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Calregulin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CALR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Calregulin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CALR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.