Plasmide Double Nickase (m) Calregulin: sc-419428-NIC

Le gène murin **Calr** code la calréticuline, une chaperonne liant le Ca2+ principalement localisée dans le réticulum endoplasmique, où elle soutient le repliement des glycoprotéines et le contrôle qualité via le cycle calnexine/calréticuline. En régulant l’homéostasie du Ca2+ du RE et en interagissant avec les protéines naissantes, la calréticuline influence la signalisation du stress du RE, la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et les voies de protéostasie en aval. **Calr** participe aussi à l’adhésion cellulaire et à une signalisation extracellulaire pertinente pour l’immunité lorsqu’elle est exposée à la surface cellulaire, ce qui la relie à des processus associés à l’inflammation. Une fonction dérégulée de la calréticuline a été associée à une altération de la signalisation du Ca2+, à un stress lié au mauvais repliement des protéines et à des phénotypes pertinents pour l’oncogenèse et des dysfonctionnements hématopoïétiques dans des systèmes expérimentaux.

Calregulin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Calr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Calr. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Calr. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Calr.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.