Calponin 1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419719-LAC

Cnn1 codifica a calponina 1, uma proteína ligante de actina enriquecida no músculo liso diferenciado, que modula a contratilidade actomiosina e a organização do citoesqueleto. A calponina 1 contribui para a regulação da montagem de fibras de estresse, da dinâmica de adesões focais e da sinalização dependente de Ca2+ por meio de suas interações com filamentos de actina e com a calmodulina, influenciando o tônus do músculo liso e a motilidade celular. A alteração da expressão de CNN1 é frequentemente usada como indicador molecular da mudança fenotípica de células de músculo liso, um processo associado ao remodelamento vascular e a alterações, ligadas à fibrose, em programas de genes contráteis. Em sistemas murinos, Cnn1 serve como leitura funcional de vias que governam a diferenciação do tipo miofibroblasto e a reprogramação do citoesqueleto durante respostas a lesão tecidual.

As Partículas de Ativação Lentivirais Calponin 1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Cnn1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Calponin 1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Cnn1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Calponin 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Cnn1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.