Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Calpain 2 (h): sc-401113
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Calpain 2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Calpain 2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Calpain 2 Antibody (E-10): sc-373966
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Calpain 2 (h) | sc-401113 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CAPN2 code la calpaïne 2, une protéase cystéine ubiquitaire dépendante du Ca²⁺, qui réalise une protéolyse limitée de protéines du cytosquelette et de signalisation afin de remodeler l’architecture cellulaire. L’activité de la calpaïne 2 contribue au renouvellement des adhérences focales, au trafic membranaire et à la modulation des voies de signalisation impliquant kinases et phosphatases, s’intégrant à des circuits qui contrôlent la migration, la survie et les réponses au stress. Par un clivage régulé de substrats impliqués dans la progression du cycle cellulaire et l’apoptose, CAPN2 aide à ajuster la protéostasie et la signalisation adaptative au cours de l’inflammation et du remodelage tissulaire. Une dérégulation de l’activité de la calpaïne 2 a été associée à une motilité anormale et à des phénotypes invasifs, à des processus neurodégénératifs liés à un influx calcique excitotoxique, ainsi qu’à des réponses modifiées au stress oxydatif ou mécanique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Calpain 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CAPN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CAPN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CAPN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Calpain 2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CAPN2 pour l'étude de la signalisation de Calpain 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CAPN2 essentiels à la fonction de Calpain 2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CAPN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Calpain 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Calpain 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CAPN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Calpain 2 plasmide HDR (h) et le Calpain 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CAPN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CAPN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.