Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
CALM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433276
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CALM O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CALM, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CALM Anticorpo (A-2): sc-271224
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CALM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433276 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Picalm (proteína de montagem de clatrina que se liga ao fosfatidilinositol) codifica a CALM, um adaptador citosólico que acopla a ligação a fosfoinositídeos à formação de invaginações revestidas por clatrina e à seleção de cargas durante a endocitose. A CALM regula a internalização de receptores, a reciclagem de vesículas sinápticas e o tráfego de endossomos, influenciando assim a homeostase de membranas e a dinâmica de sinalização a jusante. Em sistemas murinos, a perturbação de Picalm pode alterar rotas de transporte intracelular e o fluxo autofagia–lisossomo, processos frequentemente investigados em contextos neuronais e hematopoéticos. Estudos genéticos e funcionais têm relacionado a biologia de PICALM/CALM a defeitos de tráfego associados à neurodegeneração e a programas desregulados de crescimento celular, por meio de alterações na renovação de receptores e no transporte vesicular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CALM (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Picalm em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Picalm, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Picalm na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CALM.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Picalm para a investigação da sinalização de CALM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Picalm críticos para a função CALM
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Picalm para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CALM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CALM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Picalm. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CALM Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CALM (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Picalm para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Picalm definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.