Plasmide Double Nickase (h) CA VI: sc-405565-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CA VI correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CA VI Double Nickase (h) et le plasmide CA VI Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CA6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CA VI Antibody (F-12): sc-166679
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CA VI | sc-405565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CA VI | sc-405565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’anhydrase carbonique VI (CA VI), codée par le gène humain CA6, est une métalloenzyme à zinc sécrétée qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et en protons, contribuant ainsi à l’homéostasie du pH extracellulaire et à la capacité tampon de la salive et d’autres sécrétions glandulaires. En régulant l’équilibre acido-basique local, la CA VI influence des processus liés à la chimie des surfaces muqueuses, à la dynamique de déminéralisation/réminéralisation de l’émail et aux conditions microenvironnementales qui façonnent les interactions hôte–microbiome. Des modifications de l’expression de CA6 et de l’activité de la CA VI ont été associées à des variations de traits physiologiques oraux, notamment le pouvoir tampon salivaire et la susceptibilité à des altérations tissulaires dépendantes du pH, ce qui étaye son intérêt comme marqueur moléculaire de la fonction des glandes sécrétoires et de l’homéostasie épithéliale. Ces caractéristiques font de CA6 une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la biologie des anhydrases carboniques extracellulaires, la signalisation régulée par le pH et la contribution des enzymes sécrétées aux microenvironnements adjacents aux barrières.
CA VI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CA6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CA6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CA6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.