Plasmide CRISPR/Cas9 KO CA VI (m): sc-419456

Présentation

Car6 code l’anhydrase carbonique VI (CA VI), une métalloprotéine sécrétée dépendante du zinc qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et en protons, contribuant ainsi au pouvoir tampon du pH extracellulaire et à l’homéostasie du bicarbonate dans les environnements glandulaires et muqueux. En modulant la dynamique des protons, la CA VI participe à des processus liés au transport ionique épithélial et au contrôle du pH du microenvironnement, susceptibles d’influencer l’activité enzymatique, les interactions avec la matrice et la signalisation cellulaire. Dans les modèles murins, l’expression de Car6 est souvent utilisée pour étudier la régulation, dépendante des anhydrases carboniques, de l’équilibre acido-basique extracellulaire dans les tissus sécrétoires. Une régulation anormale du pH est largement pertinente dans des modèles d’inflammation, de remodelage tissulaire et de stress métabolique, ce qui fait de Car6 une cible utile pour des études mécanistiques de phénotypes sensibles au pH.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CA VI (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Car6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Car6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Car6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CA VI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Car6 pour l'étude de la signalisation de CA VI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Car6 essentiels à la fonction de CA VI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Car6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CA VI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CA VI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Car6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CA VI plasmide HDR (m) et le CA VI (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Car6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Car6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.