Plasmide Double Nickase (h) C9: sc-401198-NIC

Le composant du complément 9 (C9) code une protéine terminale de la cascade du complément qui polymérise pour former le complexe d’attaque membranaire (MAC, C5b-9) sur les membranes sensibles. Dans le cadre de la défense immunitaire innée, C9 contribue à la cytolyse dépendante du complément, à la coordination de l’opsonophagocytose et à la signalisation inflammatoire en aval de l’activation des voies classique, des lectines et alternative. Une formation dérégulée du MAC et une amplification du complément sont impliquées dans les lésions tissulaires et l’inflammation chronique, reliant la biologie de C9 à des maladies médiées par le complément touchant le rein, le réseau vasculaire et le système nerveux. La modulation expérimentale de C9 est couramment utilisée pour analyser l’assemblage terminal du complément, les interactions hôte–pathogène et les dommages cellulaires d’origine immunitaire in vitro.

C9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus C9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de C9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de C9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de C9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.