Plasmide CRISPR/Cas9 KO C8A (h): sc-406590

Présentation

C8A code la chaîne alpha du composant 8 du complément, une sous-unité essentielle du complexe terminal du complément (C5b-9) qui induit la formation du complexe d’attaque membranaire (MAC) et la lyse des cellules cibles. En tant que composante du système immunitaire inné, C8A participe à la cascade du complément en aval de l’activation des voies classique, des lectines et alternative, en influençant l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et l’élimination des complexes immuns. La perturbation des composants terminaux du complément est associée à une défense de l’hôte dérégulée et à une susceptibilité modifiée aux infections, et l’activité du complément est également impliquée dans des lésions tissulaires inflammatoires et liées à l’auto-immunité. C8A est donc pertinent pour les études de cytotoxicité médiée par le complément, d’activité bactéricide du sérum et des mécanismes contrôlant l’homéostasie immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C8A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C8A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C8A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C8A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C8A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C8A pour l'étude de la signalisation de C8A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C8A essentiels à la fonction de C8A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C8A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C8A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C8A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C8A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C8A plasmide HDR (h) et le C8A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C8A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C8A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.