Plasmide Double Nickase (h) C5: sc-401533-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) C5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide C5 Double Nickase (h) et le plasmide C5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant C5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: C5 Antibody (561): sc-52636
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) C5 | sc-401533-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) C5 | sc-401533-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le composant 5 du complément (C5) est un effecteur central de la cascade du complément, clivé par les convertases C5 en C5a et C5b, reliant la détection immunitaire innée à la signalisation inflammatoire et à l’assemblage terminal du complexe d’attaque membranaire (MAC). C5a agit comme une puissante anaphylatoxine qui favorise la chimiotaxie et la libération de cytokines via les voies des récepteurs de C5a, tandis que C5b initie la polymérisation de C6 à C9 pour induire la formation de pores sur les membranes ciblées. Par ces mécanismes, C5 régule l’opsonisation, le recrutement des leucocytes et l’élimination des agents pathogènes, et son dérèglement est impliqué dans les lésions tissulaires induites par le complément et l’inflammation chronique. Une activité altérée de C5 a été associée à des pathologies médiées par des complexes immuns et à des dommages amplifiés par le complément dans divers contextes inflammatoires et thrombo-inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de l’immunité innée.
C5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus C5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de C5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de C5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de C5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.