Plasmide CRISPR/Cas9 KO C3aR (m): sc-419392

Présentation

Le gène murin **C3ar1** code le récepteur du composant 3a du complément (**C3aR**), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à l’anaphylatoxine **C3a** générée lors de l’activation du complément. La signalisation via C3aR module la chimiotaxie des leucocytes, la dégranulation, la libération de cytokines et les réponses vasculaires, en intégrant les signaux de l’immunité innée avec des voies effectrices en aval telles que **MAPK**, **PI3K/AKT** et des voies dépendantes du calcium. Dans les cellules myéloïdes, la microglie et d’autres compartiments sensibles aux signaux immunitaires, C3aR contribue, selon le contexte, aussi bien à la résolution qu’à l’amplification de l’inflammation. Une activité dérégulée de C3aR a été impliquée dans des modèles d’inflammation allergique des voies aériennes, de pathologie auto-immune, d’immunopathologie associée aux infections et de processus neuro-inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C3aR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C3ar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C3ar1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C3ar1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C3aR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C3ar1 pour l'étude de la signalisation de C3aR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C3ar1 essentiels à la fonction de C3aR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C3ar1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C3aR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C3aR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus C3ar1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C3aR plasmide HDR (m) et le C3aR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C3ar1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C3ar1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.