Particules Lentivirales d'Activation (m2) C3: sc-419391-LAC-2

Le gène murin C3 code le composant 3 du complément, un nœud central de la cascade du complément, qui est clivé par protéolyse en C3a et C3b afin de favoriser l’opsonisation, le recrutement de cellules immunitaires et l’amplification des réponses immunitaires innées via les voies classique, des lectines et alternative. L’activation de C3 contribue à l’élimination des agents pathogènes et des complexes immuns, régule les interactions avec la coagulation et les voies de signalisation inflammatoires, et façonne l’homéostasie tissulaire en influençant la phagocytose et la production de cytokines. Une activité de C3 dérégulée est associée à une inflammation médiée par le complément et à des pathologies liées aux complexes immuns, ce qui est pertinent dans des modèles d’auto-immunité, d’infection et de processus neuro-inflammatoires. L’édition du gène C3 dans des systèmes murins permet des études mécanistiques de l’activation du complément, des interactions récepteur-ligand et des conséquences fonctionnelles in vivo ainsi que dans des tests sur des cellules immunitaires primaires.

Les particules d'activation lentivirales C3 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de C3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales C3 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription C3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de C3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif C3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.