C3 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-419391-LAC-2

Das Mausgen C3 kodiert die Komplementkomponente 3, einen zentralen Knotenpunkt der Komplementkaskade, die proteolytisch zu C3a und C3b prozessiert wird, um Opsonierung, die Rekrutierung von Immunzellen und die Verstärkung angeborener Immunantworten über den klassischen, den Lektin- und den alternativen Weg zu fördern. Die Aktivierung von C3 unterstützt die Beseitigung von Pathogenen und Immunkomplexen, reguliert die Wechselwirkungen mit Gerinnung und entzündlicher Signalübertragung und prägt die Gewebehomöostase, indem sie Phagozytose und Zytokinproduktion beeinflusst. Eine fehlregulierte C3-Aktivität ist mit komplementvermittelter Entzündung und Immunkomplex-Pathologie assoziiert und ist relevant für Modelle von Autoimmunität, Infektionen und neuroinflammatorischen Prozessen. Genom-Editing von C3 in Mausmodellen ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Komplementaktivierung, von Rezeptor-Ligand-Interaktionen und der funktionellen Konsequenzen in vivo sowie in Assays mit primären Immunzellen.

C3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente C3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

C3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der C3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen C3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen C3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.