Particules Lentivirales d'Activation (m) C1qL2: sc-432618-LAC

C1ql2 code pour C1qL2, une protéine sécrétée apparentée à la famille C1q/TNF, enrichie dans le système nerveux, qui participe à la signalisation extracellulaire et à l’organisation des synapses. C1qL2 peut se lier à des récepteurs présents à la surface des neurones et influencer la formation et la maturation des synapses, ainsi que le maintien des circuits, des processus étroitement liés à la plasticité dépendante de l’activité. Par ces signaux extracellulaires, C1qL2 s’inscrit à l’interface de voies impliquées dans la communication cellule–cellule, l’adhérence et la connectivité neuronale. Une biologie de C1qL2 dérégulée est donc pertinente pour la recherche sur les mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, dans lesquels des altérations de la structure et de la fonction synaptiques constituent des phénotypes centraux.

Les particules d'activation lentivirales C1qL2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de C1ql2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales C1qL2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription C1ql2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de C1qL2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif C1ql2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.