Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1q-A: sc-402156-ACT

C1QA code la chaîne A du composant du complément C1q, une molécule de reconnaissance qui initie la voie classique du complément en se liant aux complexes immuns et aux surfaces du soi altéré. C1q participe à l’opsonisation, à l’élimination des cellules apoptotiques et à la modulation de la signalisation de l’immunité innée, et il est fortement exprimé par les macrophages et les microglies, où il façonne les programmes inflammatoires. Par l’activation de la cascade du complément et les interactions avec les voies de phagocytose et de cytokines, C1q influence l’élagage synaptique, le remodelage tissulaire et l’homéostasie immunitaire. Une activité dérégulée de C1QA/C1q a été associée à des phénotypes auto-immuns, à la neuroinflammation et à des pathologies médiées par le complément, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en immunologie et en neurosciences.

C1q-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1QA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1q-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1QA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1QA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1q-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1QA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1q-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1q-A dans les cellules tumorales présentant une expression de C1QA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.