C1orf173 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409362-ACT

ERICH3 (noto anche come C1orf173) codifica una proteina ricca di glutammato con una caratterizzazione funzionale limitata, il che lo rende un bersaglio utile per studi meccanicistici su geni umani poco caratterizzati. Le evidenze disponibili da profili di espressione e studi di associazione genetica suggeriscono che ERICH3 possa influenzare programmi regolatori cellulari legati alla biologia neuronale e alla trascrizione responsiva allo stress, potenzialmente intersecando vie che controllano l’omeostasi dell’espressione genica e la proteostasi. In quanto cornice di lettura aperta in gran parte non caratterizzata, ERICH3 viene spesso studiato per collegare genotipo e fenotipo in analisi a livello di sistema. Pattern di espressione deregolati sono stati riportati in dataset rilevanti per la malattia, supportandone l’impiego nella ricerca esplorativa sui correlati molecolari di tratti complessi.

C1orf173 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ERICH3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1orf173 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ERICH3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ERICH3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1orf173. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ERICH3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1orf173 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1orf173 nelle cellule tumorali con espressione di ERICH3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.