Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-Mpl: sc-403035-ACT

MPL code le récepteur de la thrombopoïétine c‑Mpl, un récepteur de cytokines de classe I qui régule le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques et stimule la prolifération des mégacaryocytes ainsi que la production de plaquettes. Lors de la liaison de la thrombopoïétine, c‑Mpl transmet le signal via les voies JAK2/STAT5, MAPK/ERK et PI3K/AKT afin de coordonner la survie, la différenciation et des programmes transcriptionnels dépendants des cytokines. Une signalisation ou une expression de MPL dérégulée est associée à une hématopoïèse aberrante et fait fréquemment l’objet d’études dans le contexte des néoplasies myéloprolifératives et des syndromes de thrombocytopénie héréditaire. En tant que récepteur de surface aux marqueurs de sortie en aval bien définis, c‑Mpl constitue un point d’entrée particulièrement exploitable pour étudier la signalisation des cytokines, l’engagement de lignée et l’hématopoïèse de stress dans des modèles cellulaires humains.

c-Mpl Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MPL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Mpl Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MPL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MPL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Mpl. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MPL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Mpl au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Mpl dans les cellules tumorales présentant une expression de MPL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.