Plasmide CRISPR d'Activation (m) c-Fos: sc-420400-ACT

Le gène Fos de la souris code le facteur de transcription immédiat-précoce c-Fos, un composant du complexe AP-1 sensible aux stimuli, qui forme des hétérodimères avec des protéines JUN afin de réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la différenciation, l’adaptation au stress et la plasticité synaptique. c-Fos est rapidement induit en aval de la signalisation MAPK/ERK, de voies dépendantes du calcium et de cascades médiées par des GPCR, reliant ainsi les signaux extracellulaires au remodelage de la chromatine et de la transcription. Largement utilisé comme marqueur de l’activité neuronale et des états d’activation cellulaire, l’expression de Fos fournit un indicateur de l’engagement des voies de signalisation dans divers tissus. Une activité AP-1 dérégulée impliquant c-Fos a été associée à une signalisation inflammatoire altérée et à des réseaux transcriptionnels oncogènes, ce qui souligne sa pertinence dans des modèles de biologie tumorale et de régulation immunitaire.

c-Fos Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fos sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Fos Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fos dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fos, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Fos. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fos natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Fos au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Fos dans les cellules tumorales présentant une expression de Fos silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.