Plásmido CRISPR de Activación (m) C/EBP beta: sc-419623-ACT

El gen murino **Cebpb** codifica **C/EBP beta**, un factor de transcripción tipo *basic leucine zipper* que coordina programas génicos que controlan la diferenciación mieloide, la adipogénesis y las respuestas de fase aguda de los hepatocitos. Integra señales aguas abajo de citocinas inflamatorias y factores de crecimiento para regular la progresión del ciclo celular, la supervivencia y la remodelación metabólica, con funciones destacadas en la polarización de macrófagos y la transcripción sensible al estrés. La actividad de C/EBP beta se interseca con vías como **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JAK/STAT** y **TGF-β**, modulando la accesibilidad de la cromatina y el uso de potenciadores (*enhancers*) en células con linaje ya comprometido. La expresión o actividad desregulada de **Cebpb** se ha vinculado con fenotipos inflamatorios, disfunción metabólica y estados transcripcionales asociados a tumores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del crosstalk inmunometabólico y del control transcripcional.

C/EBP beta El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cebpb sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C/EBP beta El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cebpb en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cebpb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C/EBP beta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cebpb y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C/EBP beta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C/EBP beta en células tumorales con expresión de Cebpb silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.