BUBR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403807-NIC

BUB1B codifica per BUBR1, un componente fondamentale del checkpoint di assemblaggio del fuso mitotico, che monitora l’attacco tra cinetocori e microtubuli e limita l’attività dell’APC/C tramite il complesso di checkpoint mitotico, per prevenire l’avvio prematuro dell’anafase. Regolando la congressione dei cromosomi, la coesione dei cromatidi fratelli e la progressione dell’anafase, BUBR1 contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e a ridurre l’aneuploidia derivante da errori di segregazione cromosomica. La disregolazione di BUB1B/BUBR1 è stata associata a fenotipi di instabilità cromosomica ed è stata studiata nel contesto di disturbi dello sviluppo e della crescita, nonché di difetti del checkpoint mitotico legati al cancro. Di conseguenza, BUBR1 è ampiamente utilizzato come punto di ingresso molecolare per analizzare le reti di controllo della mitosi e la segnalazione del cinetocoro nelle cellule umane.

BUBR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BUB1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BUB1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BUB1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BUB1B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.