Plasmide CRISPR d'Activation (h) BRD9: sc-404933-ACT

BRD9 code la protéine 9 contenant un bromodomaine, un « lecteur » épigénétique qui reconnaît les marques d’acétyl-lysine sur les histones et contribue à coordonner l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. BRD9 fonctionne comme une sous-unité des complexes non canoniques de remodelage de la chromatine SWI/SNF (ncBAF), reliant l’acétylation des histones au positionnement des nucléosomes dépendant de l’ATP et à la régulation des enhancers. Grâce à ces activités, BRD9 participe au contrôle de programmes d’état cellulaire, notamment la prolifération, la différenciation et la transcription en réponse au stress. Un remodelage de la chromatine associé à BRD9 dérégulé a été impliqué dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, en particulier dans les cancers, où des circuits transcriptionnels altérés et des dépendances de lignée constituent des thèmes de recherche fréquents.

BRD9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BRD9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BRD9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BRD9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BRD9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BRD9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BRD9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BRD9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BRD9 dans les cellules tumorales présentant une expression de BRD9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.