Particules Lentivirales d'Activation (h) BRCA2: sc-400700-LAC

BRCA2 code un suppresseur de tumeur majeur qui préserve l’intégrité du génome en coordonnant la réparation à haute fidélité des cassures double brin de l’ADN par recombinaison homologue. BRCA2 favorise la formation des filaments de RAD51 et régule la protection des fourches de réplication, l’associant à la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, au contrôle du point de contrôle de la phase S et au maintien de la stabilité chromosomique. La perturbation ou la dérégulation de la fonction de BRCA2 est fortement liée à la susceptibilité aux cancers héréditaires et sporadiques, ce qui reflète son rôle dans la prévention de l’accumulation de mutations et de la recombinaison aberrante. BRCA2 est donc largement étudié dans les voies impliquées dans le stress de réplication, la réparation médiée par la recombinaison et les phénotypes de maintenance du génome pertinents pour la transformation oncogénique.

Les particules d'activation lentivirales BRCA2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BRCA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRCA2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BRCA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BRCA2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BRCA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.