Plasmide CRISPR d'Activation (m) BORIS: sc-437064-ACT

Le gène murin **Ctcfl** code **BORIS** (*Brother of the Regulator of Imprinted Sites*), un paralogue de **CTCF** enrichi dans les testicules, qui se lie à des éléments d’ADN de type isolateur et participe à l’organisation de la chromatine ainsi qu’à la régulation transcriptionnelle. BORIS peut influencer l’état épigénétique en interagissant avec des régions régulatrices sensibles à la méthylation de l’ADN et en modulant la communication entre enhancers et promoteurs, affectant ainsi des programmes d’expression génique liés au développement des cellules germinales et à l’identité cellulaire. Une expression aberrante de BORIS a été associée à la dérépression de loci normalement silencieux, à une accessibilité de la chromatine modifiée et à un remodelage des programmes transcriptionnels observé dans des contextes oncogéniques. Ces propriétés font de **Ctcfl** un modèle utile pour étudier l’architecture du génome, la régulation liée à l’empreinte génomique et les mécanismes de dérégulation épigénétique dans des systèmes murins.

BORIS Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ctcfl sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BORIS Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ctcfl dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ctcfl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BORIS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ctcfl natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BORIS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BORIS dans les cellules tumorales présentant une expression de Ctcfl silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.