Plasmide CRISPR/Cas9 KO Bok (h): sc-407699

Présentation

BOK (BCL2-related ovarian killer) code Bok, un membre pro-apoptotique de la famille des protéines BCL-2, qui contribue à l’apoptose intrinsèque en influençant la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et l’activation des caspases en aval. Bok a été associé à la biologie du réticulum endoplasmique et des membranes associées aux mitochondries (MAM), à l’interface de voies de réponse au stress qui intègrent la protéostase et les décisions de destinée cellulaire. À ce titre, BOK est étudié dans des contextes où les seuils d’apoptose et la sensibilité au stress cellulaire sont modifiés, notamment en biologie du cancer, dans la signalisation du stress liée aux neurodégénérescences et dans l’homéostasie tissulaire. Sa régulation et son recouvrement fonctionnel avec d’autres protéines de la famille BCL-2 en font un nœud pertinent pour disséquer la redondance des voies et l’amorçage apoptotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Bok (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BOK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BOK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BOK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Bok.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BOK pour l'étude de la signalisation de Bok, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BOK essentiels à la fonction de Bok
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BOK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Bok plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Bok plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BOK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Bok plasmide HDR (h) et le Bok (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BOK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BOK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.