Plasmide CRISPR d'Activation (m) BMP-7: sc-419346-ACT

La protéine morphogénétique osseuse 7 (Bmp7) code la BMP‑7, un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β qui signale via des récepteurs sérine/thréonine kinases de type I/II afin d’activer SMAD1/5/8 et les programmes transcriptionnels en aval. Dans les cellules de souris, la BMP‑7 régule la mise en place des patrons embryonnaires, le développement squelettique, la morphogenèse rénale et la différenciation épithéliale, avec un dialogue (crosstalk) dépendant du contexte avec les voies MAPK. La BMP‑7 influence également le remodelage de la matrice extracellulaire et la transition épithélio‑mésenchymateuse, des processus fréquemment étudiés en biologie de la fibrose et dans des modèles de réparation tissulaire. Une signalisation BMP‑7 dérégulée a été associée à des anomalies du développement et à une homéostasie des organes altérée, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation dans des systèmes pertinents pour les maladies.

BMP-7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bmp7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bmp7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bmp7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bmp7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de Bmp7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.