BMP-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401979

Descripción general

BMP6 codifica la proteína morfogenética ósea 6 (BMP-6), un ligando secretado de la superfamilia TGF-β que señaliza principalmente a través de receptores BMP tipo I/II con actividad quinasa serina/treonina para activar programas transcripcionales dependientes de SMAD1/5/8. BMP-6 contribuye a la diferenciación osteogénica y condrogénica, a la regulación de la matriz extracelular y a la remodelación tisular, y también se relaciona con contextos de señalización implicados en el patrón del desarrollo y en procesos asociados a la fibrosis. En la homeostasis del hierro, BMP-6 es un regulador clave aguas arriba de la expresión hepática de hepcidina mediante la vía BMP/SMAD, lo que vincula la actividad de BMP6 con el equilibrio sistémico del hierro. La señalización de BMP6 desregulada se ha asociado con trastornos que implican mineralización aberrante, fibrosis y alteraciones del metabolismo del hierro, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos celulares relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BMP-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BMP6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BMP6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BMP6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BMP-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BMP6 para la investigación de la señalización de BMP-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BMP6 críticos para la función de BMP-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BMP6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BMP-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BMP-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BMP6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BMP-6 (h) y el plásmido HDR BMP-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BMP6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BMP6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.