Particules Lentivirales d'Activation (m2) BMCP1: sc-422996-LAC-2

Le gène murin Slc25a14 code la protéine porteuse mitochondriale cérébrale 1 (BMCP1), un transporteur de la membrane interne mitochondriale appartenant à la famille SLC25, impliqué dans la régulation de la fuite de protons et de l’efficacité du couplage mitochondrial. L’activité de BMCP1 influence la phosphorylation oxydative, le potentiel de membrane, la production d’ATP et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène, façonnant ainsi les réponses des neurones et des tissus à forte activité métabolique aux exigences énergétiques et au stress. Une fonction altérée de Slc25a14 a été étudiée dans le contexte d’une dysfonction mitochondriale et d’un déséquilibre rédox pertinents pour la neurodégénérescence et certains phénotypes métaboliques. L’édition génétique de Slc25a14 dans des modèles murins soutient la recherche mécanistique sur la bioénergétique mitochondriale, la signalisation adaptative au stress et les relations génotype–phénotype au sein des voies des transporteurs mitochondriaux.

Les particules d'activation lentivirales BMCP1 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Slc25a14 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BMCP1 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Slc25a14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BMCP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Slc25a14 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.