Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bim_EL: sc-400515-ACT

BCL2L11 code pour Bim, un membre pro-apoptotique « BH3-only » de la famille BCL-2, qui relie les signaux de stress cellulaire à la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et à l’activation des caspases. L’isoforme Bim_EL est une forme majeure régulée par phosphorylation, qui intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK, JNK et PI3K/AKT afin d’ajuster l’apoptose, l’anoïkis et l’homéostasie des cellules immunitaires. En antagonisant les protéines anti-apoptotiques de la famille BCL-2 et en activant BAX/BAK, Bim contribue à déterminer le devenir cellulaire lors du retrait de facteurs de croissance, du stress du réticulum endoplasmique (RE) et de perturbations du cytosquelette. Une expression dérégulée de BCL2L11 ou un contrôle anormal de sa signalisation est impliqué dans la survie des cellules cancéreuses, les mécanismes de résistance aux traitements et des pathobiologies liées à l’immunité, ce qui en fait un nœud clé pour la recherche sur l’apoptose et les réponses au stress.

BimEL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL2L11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BimEL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL2L11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL2L11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BimEL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL2L11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BimEL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BimEL dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL2L11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.