Plasmide CRISPR d'Activation (m) BDNF: sc-419319-ACT

Le gène murin **Bdnf** code le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF), une neurotrophine sécrétée qui se lie à TRKB/NTRK2 et à p75NTR afin de réguler la survie neuronale, la différenciation, la plasticité synaptique et le remodelage des circuits dépendant de l’activité. La signalisation du BDNF mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ pour moduler des programmes transcriptionnels, la dynamique des épines dendritiques et la libération de neurotransmetteurs. Dans le système nerveux central, le BDNF est au cœur des processus d’apprentissage et de mémoire et contribue à la plasticité dépendante de l’expérience. Des altérations de l’expression de **Bdnf** ou de sa signalisation ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques et font l’objet de nombreuses études dans des modèles de neurodégénérescence, de réponse au stress et de régulation métabolique.

BDNF Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bdnf sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BDNF Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bdnf dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bdnf, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BDNF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bdnf natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BDNF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BDNF dans les cellules tumorales présentant une expression de Bdnf silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.