BCNP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404731-ACT

FAM129C kodiert BCNP1, ein intrazelluläres Protein, das an Signalwegen und Transkriptionsprogrammen beteiligt ist, die den Zustand von Immunzellen sowie stressadaptive Reaktionen prägen. Die Expression von FAM129C ist in hämatopoetischen Zelllinien angereichert und wurde mit der Modulation entzündlicher Signalübertragung und rezeptorvermittelter Signalwege in Verbindung gebracht, die Zellüberleben und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte BCNP1-Expression wurde bei verschiedenen immunassoziierten Erkrankungen und in mehreren Krebskontexten beschrieben, was seine Eignung als molekularer Ansatzpunkt zur Untersuchung von Linienplastizität und Tumor–Immun-Interaktionen unterstreicht. Dadurch dient FAM129C als nützlicher Knotenpunkt, um das Umverdrahten von Signalwegen in Immunität, Proliferation und zellulärer Stressbiologie in humanen Modellsystemen zu analysieren.

BCNP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FAM129C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BCNP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FAM129C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FAM129C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BCNP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FAM129C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BCNP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BCNP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FAM129C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.