Plasmide CRISPR d'Activation (m) BCLAF1: sc-428381-ACT

Le gène murin BCLAF1 (Bclaf1) code la protéine BCLAF1, un facteur nucléaire de liaison à l’ADN et à l’ARN qui intègre le contrôle transcriptionnel à l’épissage du pré‑ARNm et à l’expression de gènes sensibles au stress. Il a été associé à la régulation de programmes d’apoptose et d’autophagie, et participe à des processus liés à la chromatine qui modulent la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN. Par ces activités, BCLAF1 influence les décisions de destinée cellulaire dans des contextes immunitaires et épithéliaux, et fait l’objet d’études fréquentes dans des voies impliquées dans la transformation oncogénique et la signalisation inflammatoire. La dérégulation des réseaux de transcription et de maturation de l’ARN dépendants de BCLAF1 a été associée, dans des modèles pertinents pour la maladie, à des altérations de la signalisation de survie et à des phénotypes touchant la stabilité du génome.

BCLAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bclaf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BCLAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bclaf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bclaf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BCLAF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bclaf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BCLAF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BCLAF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Bclaf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.