Plasmide Double Nickase (h) BChE: sc-401834-NIC

La butyrylcholinestérase (BCHE) code la BChE, une hydrolase à sérine sécrétée, abondante dans le plasma, qui hydrolyse les esters de choline et contribue à l’homéostasie cholinergique systémique. En captant et en métabolisant une gamme de substrats estérifiés, la BChE se situe au carrefour du métabolisme des xénobiotiques et des processus de détoxification, et peut moduler la disponibilité de l’acétylcholine dans les tissus périphériques. Des variations génétiques et d’expression de BCHE ont été associées à des modifications de l’activité cholinestérase et à des phénotypes pertinents pour la neurobiologie, le métabolisme et les réponses inflammatoires, ce qui en fait un locus utile pour des études mécanistiques. BCHE est également largement utilisé comme gène biomarqueur fonctionnel dans les études portant sur la régulation des cholinestérases et les voies de sensibilité aux organophosphorés.

BChE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BCHE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BCHE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BCHE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BCHE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.