Bax Plasmide Double Nickase (h): sc-400042-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Bax Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Bax Double Nickase Plasmid (h) e il Bax Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BAX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Bax Antibody (B-9): sc-7480
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Bax Plasmide Double Nickase (h) | sc-400042-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bax Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400042-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BAX codifica Bax, un effettore pro-apoptotico della famiglia BCL-2 che regola la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale e impegna le cellule nell’apoptosi intrinseca. In risposta a stress cellulari e a segnali di danno al DNA, Bax subisce un’attivazione conformazionale, trasloca ai mitocondri e oligomerizza per favorire il rilascio del citocromo c e la conseguente attivazione delle caspasi a valle. L’attività di Bax si integra con i checkpoint regolati da p53 e con le reti di segnalazione pro-sopravvivenza, influenzando così le decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Una deregolazione della segnalazione di BAX è ampiamente implicata nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione e nelle risposte allo stress genotossico, rendendolo un nodo molto utilizzato per studiare l’apoptosi e il controllo della via mitocondriale.
Bax Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BAX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BAX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BAX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BAX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.