Plasmide CRISPR d'Activation (h) BAT2: sc-409707-ACT

PRRC2A code la protéine humaine BAT2, un grand facteur de liaison à l’ARN riche en proline, impliqué dans la régulation génique post‑transcriptionnelle, notamment la stabilité des ARNm et le contrôle de la traduction. BAT2 a été associée au métabolisme de l’ARN en réponse au stress et, plus largement, à la régulation de programmes d’expression génique qui influencent la croissance et la différenciation cellulaires. Des variations génétiques et une expression dérégulée au niveau du locus PRRC2A/BAT2 ont été rapportées dans des traits liés à l’immunité et dans des régions génomiques associées au cancer, ce qui étaye sa pertinence dans des voies qui modulent la signalisation inflammatoire et la biologie tumorale. Ces caractéristiques font de PRRC2A une cible utile pour disséquer les réseaux de régulation de l’ARN et leurs effets en aval sur le phénotype cellulaire.

BAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRRC2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRRC2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRRC2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRRC2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRRC2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.