Plasmide Double Nickase (h) BAG-6: sc-402780-NIC

BAG6 (BAG-6) code un co-chaperon multifonctionnel impliqué dans le contrôle qualité des protéines et la protéostasie cellulaire, en coordonnant la prise en charge des polypeptides mal repliés ou mal localisés. BAG-6 participe à des voies liées à la dégradation dépendante de l’ubiquitine et au repliement assisté par des chaperons, et est également associé à des processus tels que la présentation des antigènes et la régulation de l’apoptose en situation de stress protéotoxique. Par ces rôles, BAG-6 influence les mécanismes de surveillance associés au RE (réticulum endoplasmique) et ceux du cytosol, qui façonnent les réponses cellulaires au stress et la signalisation liée à l’immunité. La dérégulation des réseaux de protéostasie dépendants de BAG6 a été étudiée dans des contextes impliquant une tolérance au stress altérée, l’homéostasie immunitaire et des phénotypes associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des investigations mécanistiques.

BAG-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BAG6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BAG6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BAG6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BAG6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.