Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bag-3: sc-402929-ACT

BAG3 (Bag-3) est un co‑chaperon inductible par le stress qui se lie à HSP70/HSC70 pour coordonner le contrôle qualité des protéines, en équilibrant la protéostasie, l’autophagie et l’apoptose dans les cellules humaines. Il soutient l’autophagie sélective assistée par les chaperons et influence l’organisation du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la mécanotransduction, en particulier en conditions de stress protéotoxique ou oxydatif. Par ces fonctions, BAG3 contribue à la régulation des voies de survie cellulaire et au renouvellement des protéines endommagées ou sujettes à l’agrégation. Une expression ou une fonction dérégulée de BAG3 a été associée à des cardiomyopathies et à des troubles neuromusculaires, et BAG3 est fréquemment étudié dans le contexte de l’adaptation des cellules tumorales au stress et de la résistance au stress protéotoxique.

Bag-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BAG3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bag-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BAG3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BAG3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bag-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BAG3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bag-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bag-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de BAG3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.