Plasmide Double Nickase (m) B7-H4: sc-433877-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) B7-H4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide B7-H4 Double Nickase (m) et le plasmide B7-H4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Vtcn1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: B7-H4 Antibody (9): sc-66189
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) B7-H4 | sc-433877-NIC | 20 µg | $410.00 |
Vtcn1 code pour la protéine de point de contrôle immunitaire co-inhibitrice B7-H4, un membre de la famille B7 qui limite l’activation des lymphocytes T et module les réponses inflammatoires en supprimant la prolifération et la production de cytokines. Dans les tissus murins, l’expression de B7-H4 sur les cellules présentatrices d’antigène et dans les compartiments non hématopoïétiques contribue à la tolérance immunitaire périphérique et façonne les interactions entre lignées myéloïdes et lymphoïdes au sein du microenvironnement tissulaire. Une signalisation B7-H4 dérégulée est fréquemment étudiée en immunologie des tumeurs, où un déséquilibre des points de contrôle peut influencer l’échappement immunitaire et l’immunité antitumorale, ainsi que dans des modèles d’inflammation chronique et d’auto-immunité. Vtcn1/B7-H4 est donc pertinent pour les voies qui régissent la régulation immunitaire, la communication intercellulaire et le contrôle, par le microenvironnement, des réponses immunitaires adaptatives.
B7-H4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Vtcn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Vtcn1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Vtcn1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Vtcn1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.