Plasmide CRISPR d'Activation (h) B7-2: sc-418032-ACT

Le CD86 humain (B7-2) est une glycoprotéine membranaire de type I exprimée principalement par les cellules présentatrices d’antigène, où elle fournit un signal de costimulation essentiel aux lymphocytes T via l’engagement de CD28 et de CTLA-4. En s’intégrant à la signalisation du récepteur des cellules T, B7-2 module l’activation lymphocytaire, la production de cytokines et la différenciation, façonnant les réponses immunitaires adaptatives et la tolérance périphérique. CD86 participe à la formation de la synapse immunologique et contribue à des programmes transcriptionnels liés à NF-κB et à PI3K/AKT qui régissent les états d’activation des compartiments immunitaires inné et adaptatif. Une expression dérégulée de CD86 a été impliquée dans l’auto-immunité, l’inflammation chronique, la biologie du rejet de greffe et les contextes d’échappement immunitaire tumoral, ce qui en fait une cible fréquente en immunologie et dans la recherche axée sur le microenvironnement.

B7-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD86 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

B7-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD86 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD86, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de B7-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD86 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de B7-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie B7-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD86 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.