Plasmide Double Nickase (h) B7-1: sc-401971-NIC

CD80 (B7-1) est un ligand costimulateur inductible de la superfamille des immunoglobulines, exprimé principalement à la surface des cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à CD28 et à CTLA-4 afin de moduler l’activation, la prolifération et la tolérance des cellules T. En s’intégrant à la signalisation du TCR, CD80 influence en aval les programmes PI3K–AKT, NF-κB et de transcription des cytokines, qui façonnent les réponses immunitaires adaptatives. Une expression dérégulée de CD80 est impliquée dans un déséquilibre des points de contrôle immunitaires et une présentation antigénique aberrante observés dans divers contextes inflammatoires et auto-immuns, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre des interactions tumeur–système immunitaire. En tant que marqueur de surface doté d’une biologie des récepteurs bien caractérisée, CD80 est couramment utilisé pour analyser la maturation des CPA, les seuils de costimulation et la formation de la synapse immunologique dans des modèles cellulaires humains.

B7-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD80 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD80. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD80. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD80.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.