Plasmide CRISPR d'Activation (h) B7-1: sc-401971-ACT

Le CD80 humain (B7-1) est un ligand costimulateur de la superfamille des immunoglobulines, exprimé principalement par les cellules présentatrices d’antigène, où il se lie à CD28 et à CTLA-4 sur les lymphocytes T afin de moduler l’activation, la prolifération et la production de cytokines. En influençant la formation de la synapse immunologique et en intégrant des signaux complémentaires à l’engagement du TCR, B7-1 agit sur les voies en aval qui contrôlent la différenciation des cellules effectrices et la tolérance périphérique. Une expression dérégulée de CD80 est impliquée dans une activation immunitaire aberrante et dans des mécanismes de tolérance altérés observés dans diverses maladies auto-immunes et inflammatoires, et ce marqueur est fréquemment évalué en immunologie tumorale comme déterminant de la capacité de présentation de l’antigène. In vitro, CD80 constitue un marqueur clé et un nœud fonctionnel dans les études portant sur la maturation des cellules dendritiques, la polarisation des macrophages et l’amorçage des lymphocytes T.

B7-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD80 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

B7-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD80 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD80, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de B7-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD80 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de B7-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie B7-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD80 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.